ột viên thuốc bí ẩn từ thời Ai Cập cổ đại biến các bức tượng và nhân vật trong tranh của bảo tàng Lịch sử tự nhiên Mỹ thành sinh vật sống vào ban đêm. Chúng choảng nhau sau khi mặt trời lặn, rồi quay trở về tư thế ban đầu khi bình minh tới.
Larry Daley (Ben Stiller) là anh chàng rất lận đận trong công việc. Quá chán ngán trước ông chồng hậu đậu, cô vợ đâm đơn ra tòa ly dị. Kể từ đó, tình hình của Larry càng trở nên bi đát hơn. Anh chẳng giữ được việc nào quá một tuần. Không có khả năng tài chính, anh chàng không giành được quyền nuôi cậu con trai Nick (Jake Cherry). Không biết sau lần nộp đơn xin việc lần thứ mười mấy, Larry được Bảo tàng Lịch sử tự nhiên nhận vào làm nhân viên gác đêm.
Chàng nhân viên mới được Cecil, Gus và Reginald - ba nhân viên bảo vệ cũ - dẫn đi một vòng quanh bảo tàng và hướng dẫn kỹ càng về những việc cần làm, trong đó họ nhắc đi nhắc lại là "không được để bất cứ thứ gì lọt vào hay ra khỏi bảo tàng". Cho rằng đó là chuyện đương nhiên, Larry không quan tâm cho lắm tới thái độ cẩn thận quá mức cần thiết của mấy tay bảo vệ sắp thôi việc.
Ngay trong đêm đầu tiên làm nhiệm vụ, Larry được chứng kiến những hiện tượng bất thường : những đấu sĩ La Mã, chiến binh Maya và các chàng cao bồi miền tây đột nhiên bước ra khỏi các bức tranh và đánh lẫn nhau; một người Neanderthal cổ đại bỗng dưng châm lửa vào cơ thể; một con khủng long T-Rex đột ngột gầm vang, rồi giơ móng vuốt dọa Larry. Trong cơn hỗn loạn, Larry được bức tượng sáp của cựu tổng thống Theodore Roosevelt (Robin Williams) cứu thoát. Bức tượng giải thích rằng kể từ khi một viên thuốc bí ẩn của Ai Cập được đưa vào trong bảo tàng cùng với một lời nguyền, tất cả mọi con vật và người trong phòng trưng bày đều trở thành sinh vật sống vào ban đêm. Tuy nhiên, nếu không được đưa trở lại đúng vị trí trước khi mặt trời mọc, tất cả bọn chúng sẽ biến thành cát bụi.
Theo lời khuyên của Cecil, Larry lao vào tìm hiểu nguồn cơn của những sự kiện bất thường để có thể đối phó tốt hơn trong những lần sau. Anh gặp cô sinh viên Rebecca (Carla Gugino) khi cô tới bảo tàng để tìm tư liệu về nhân vật huyền thoại Sacagewea của người Maya. Cô tỏ ra bực bội khi Larry nói rằng anh có thể giới thiệu cô với Sacagewea bằng xương bằng thịt để nói chuyện trực tiếp. Mặc dù vậy, Larry vẫn quyết thực hiện ý định của mình. Kế hoạch đổ vỡ khi một con khỉ có tên Dexter lấy trộm chùm chìa khóa và để cho một người tiền sử chạy ra ngoài qua cửa sổ. Hậu quả là sáng hôm sau, người tiền sử đó biến thành đất.
Larry hiểu rằng, anh có khả năng mất việc sau khi để mất bức tượng người tiền sử. Để gây ngạc nhiên cho con trai, anh cùng đưa cậu đi trực. Nhưng trong đêm đó chẳng có gì xảy ra. Ngay lập tức Larry phát hiện ra rằng ba người bảo vệ cũ đã đánh cắp viên thuốc Ai Cập, vì nó có thể giúp họ trẻ lại. Nick cướp được viên thuốc và để vào chỗ cũ để các bức tượng trở thành sinh vật sống. Sự việc trở nên tồi tệ khi ba nhân viên cũ khóa hai bố con trong phòng trưng bày các cổ vật Ai Cập.
Do đã nghiên cứu về các cổ vật, Larry bèn mở chiếc quách đựng xác ướp của Ahkmenrah để giải phóng vị vua này. Nhờ có sự giúp đỡ của Ahkmenrah, Larry thuyết phục được các bức tượng rằng chúng cần phải lấy lại viên thuốc bí ẩn, nếu không chúng sẽ chẳng bao giờ sống lại được nữa. Các bức tượng bắt được Gus và Reginald, nhưng Cecil chạy thoát cùng viên thuốc. Anh chàng Larry khốn khổ phải làm gì đây khi bình minh sắp tới gần?
Bác nào làm con Taken 1-2-3 đi 
